PRACTICA 1 CATALASA Y DESHIDROGENASA LACTICA

PRACTICA 1 DE BIOQUIMICA 2 "CATALASA Y DESHIDROGENASA LACTICA

INTRODUCCION


En general, llamamos inhibición enzimática a la disminución o perdida de la actividad enzimática, por la unión a la enzima de moléculas distintas del sustrato, llamadas inhibidores.

La catalasa (E.C. 1.11.1.6. Peróxido de hidrogeno: peróxido de hidrogeno oxidoreductasa) es una enzima con un grupo hemo, cuya función es la destrucción del peróxido de hidrogeno, producto de varias oxidaciones biológicas. La descomposición del peróxido de hidrogeno se puede considerar como la oxidación de una molécula por otra. La reacción es:

                -------->
2H2O2     CATALASA   O2 + 2 H2O

Puede utilizar como sustrato además del peróxido de hidrogeno, alquilos de peróxido de hidrogeno, etanol, formato, ácido nitroso, compuestos tiol y pirogalol. El mecanismo de reacción es a través de la formación de un complejo catalasa – peróxido de hidrogeno. En los peroxisomas se encuentran grandes cantidades de catalasa. En estos orgánulos, se generan grandes cantidades de H2O2, por lo que es necesaria la acción de la catalasa para convertirlo en agua.

Lactato deshidrogenasa (E.C. 1.1.1.28) Es una enzima que cataliza la reducción reversible del piruvato a lactato, utilizando la coenzima NADH como agente reductor. Algunos autores llaman esta reacción como la ultima de la glucolisis; y sucede cuando la cantidad de oxigeno es limitada, como en el musculo durante la actividad física. Esto la diferencia de otras formas fermentativas anaerobias del catabolismo de los carbohidratos. La forma enzimática más común tiene un peso molecular de 140,000 pero todas las de los vertebrados están formadas por tetrámeros, con cuatro sitios catalíticos independientes de cada tetrámero.

                                             <-------------

CH3COCOO- + NADH + H+ --------------->CH3CH2OCOO- + NAD+

El lactato es el producto de la reacción, producida en condiciones anaerobias, difunde a través de la membrana plasmática para quedar en los alrededores como producto de desecho. El dolor ocasionado por la fatiga y el rigor de las fibras musculares se debe en gran parte a la acumulación de lactato en el musculo.

En el hígado, el lactado es reconvertido a piruvato gracias al lactato deshidrogenasa. Esta enzima es utilizada por los médicos para el diagnostico y seguimiento de un infarto de miocardio.OBJETIVOS

-Observar la reacción de la catalasa y el efecto de algunos inhibidores como cianuro, nitrato de plomo o calentamiento a altas temperaturas.

-Observar y conocer la reacción de la deshidrogenasa láctica.MATERIALES

Gradilla

Vaso de precipitados de 500 mL.

Vaso de precipitados de 250 mL.

4 pipetas de 5 mL.

9 tubos de ensaye de 15x150

Pinzas para tubo de ensaye

Mechero, tripie y tela de asbestos

PROCEDIMIENTO
CATALASA

1) En una gradilla coloque cuatro tubos de ensaye numerados del 1 al 4

2) Pipetee 2.0 mL. De peroxido de Hidrogeno al 3% a cada uno de los cuatro tubos.

3) Agregue 5 gotas de cianuro de sodio al 5% al tubo numero 3.

4) Agregue 5 gotas de nitrato de plomo al 5% al tubo numero 4.

5) En un tubo de ensaye aparte, tome 3 mL. De sangre diluida 1:50 y caliéntelos en agua hirviendo por 5 minutos. Agréguelos al tubo número 2.

6) Añada 3 mL. De sangre diluida a los tubos 1,3 y 4

7) Agite suave pero rápidamente y lleve los tubos a baño maría a 37° C

8) Déjelos estar por 5 minuto, haga sus observaciones y anote los resultados

NOTA: Como la reacción es muy rápida , la observación no debe descontinuarse desde el momento de añadir la sangre, hasta dar por terminada la reacción al cabo de 2 minutos.

DESHIDROGENASA LACTICA

1) Coloque en la gradilla tres tubos de ensaye numerados del 1 al 3

2) Agregue 5 mL. De Azul de Metileno al 0.02% a cada uno de los tres tubos.

3) Agregué 10 gotas de Lactato de sodio al 5% a los tubos 1 y 2

4) En un tubo de ensaye aparte, tome 5 mL. De suspensión de levadura al 20% y caliéntela en baño de agua hirviendo por 5 minuto. Agregue al tubo Numero 2.

5) Agregue 5 mL. De suspensión de levadura sin calentar a los tubos 1 y 3.

6) Mezcle bien, y cubra los tubos con una capita de aceite mineral, inclinando los tubos y dejando que el aceite corra por la pared del tubo lentamente.

7) Coloque los tubos en baño de agua a 37° C y observe el resultado a los 3, 6, 9, 12, y 15 minutos, ocasionalmente agite suavemente.

8) Anote sus observaciones


CUESTIONARIO

1. ¿Cuál es el efecto del cianuro en la reacción de la catalasa y como se explica el fenómeno?

La catalasa tiene un peso molecular de 250,000 con cuatro grupos heme y un átomo de hierro en el centro de cada heme. El cianuro se combina con el hierro presente en la molécula de la catalasa, por lo tanto tiene un efecto inhibidor.

2. ¿Qué inhibidor es mejor, el cianuro o el nitrato de plomo?

El cianuro porque hizo menos espuma y eso significa que inhibio a las enzimas desde su sitio activo.

3. Escriba la reacción de la catalasa, y diga ¿A que se deben las burbujas cuando se añade sangre al vaso de reacción?

La reacción es:
            ----------->

2H2O2 CATALASA   O2 + 2 H2O

Así que las burbujas que observamos es la liberación de O2 producto de la reacción.

4. ¿Cuál es la fuente de la catalasa en la reacción hecha en el laboratorio?

De los glóbulos rojos de la sangre que utilizamos en la práctica.

5. ¿Cuál es la función normal de la catalasa en el organismo humano?

La conversión del peróxido de hidrogeno en agua que se genera como producto secundario de las reacciones oxidativas de los peroxisomas. También utiliza al peróxido de hidrogeno para oxidar otros sustratos.

6. ¿Por qué la reacción de la deshidrogenasa láctica se hace más rápidamente cuando en nuestro experimento añadimos lactato de sodio?

Porque normalmente la reacción es muy lenta, así que agregamos mas lactato para que se acelere la reacción y podamos ver el cambio de color más fácilmente.

7. ¿Qué función tiene el azul de metileno en la reacción de la deshidrogenasa láctica? Explique detalladamente. ¿Qué otro compuesto podría usarse en vez de azul de metileno?

El azul de metileno se utiliza como aceptor de hidrogeno, pues posee la propiedad muy útil de cambiar de color al pasar de oxidado a reducido. Es azul de metileno cuando esta oxidado y blanco (incoloro) de metileno cuando esta reducido. El azul de metileno es un indicador de REDOX no de viraje de pH por lo que podríamos utilizar un indicador con la misma propiedad como el Sal férrica de la 1-10 ortofenantrolina, que cambia de azul palido a rojo. Ácido difenilaminosulfónico, de incoloro a violeta.

3 comentarios:

Anónimo dijo...

jajajaja no mames que de aqui sake toda la tareaXD, pero unas referencias bibliograficas no estarian mal

Anónimo dijo...

Muy buena la info ;)

Anónimo dijo...

aki esta todo el cuestionario de la practica jajaj exelente inventare la bibliografia haha

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