Pancreatina

OBJETIVO


Observar la acción de la lipasa pancreática sobre la leche homogenizada, titulando usando la base de hidróxido de potasio (KOH).


INTRODUCCION

La lipasa (EC.3.1.1.3) es una enzima liberada por el páncreas dentro del intestino delgado y que desencadena la descomposición de las grasas en ácidos grasos, en gran variedad de seres vivos.

Su función principal es catalizar la hidrólisis de triacilglicerol a glicerol. Las lipasas se encuentran en gran variedad de seres vivos.

Esta enzima en humanos se encuentra en la leche materna y, según estudios bioquímicos, es idéntica a la enzima colesterol esterasa (o lipasa pancreática no específica), por lo que se supone que el origen es pancreático y llega a las glándulas mamarias a través de la circulación sanguínea. La función principal de esta lipasa gástrica es ayudar a la absorción de grasas.

La acción de la lipasa pancreática es favorecer la hidrólisis de los lípidos; su carencia resulta en la no digestión de las grasas. En nutrición deben usarse ácidos grasos que impidan una excesiva secreción y actuación por parte de la lipasa.

La lipasa (Triacil Glicerol Acil Hidrogenasa). Se llamaba antiguamente esteapsina, contiene diversas fracciones proteicas de muy diversos pesos moleculares, que van desde 39,000 hasta 200,000, todas ellas con actividad lipolítica. Estas esterasas hidrólisis substratos emulsificados, y no ataca a substratos en verdadera solución. Se cree que esto se debe a que la enzima se absorbe a su substrato emulsificado, y la velocidad inicial de reacción está en función del número de moléculas de enzima adsorbidas en la interfase.

La pancreática es una mezcla de enzimas pancreáticas; es un extracto de páncreas con fuerte actividad lipolítica.

En la práctica se utiliza la titulación; que es un método titrimetrico. En este existe una solución de un compuesto del cuál sabes su concentración y mides la cantidad de una sustancia desconocida en otra solución. Es un método indirecto, conociendo cuanto gastaste de la solución conocida por cálculo sacas cuanto tienes de la sustancia desconocida. En nuestro caso es la titilación para lograr estimar la cantidad de ácidos grasos liberados de los esteres.

El efecto de la lipasa se determina, sobre muestras de leche con diferente contenido de grasa y/o grado de homogenización, es decir cuanto necesita para hidrolizarse los ácidos grasos de la leche con la lipasa.

MATERIALES

5 Tubos de ensaye de 15x150
5 Vaso de precipitado de 250 ml
1 Pipeta de 5 ml
1Pipeta de 10 ml
1 Bureta de 25 ml
1 Soporte
1 pinzas mariposa
1 Gradilla
1 Agitador
1 Termómetro de 100°C


PROCEDIMIENTO

Acción de la lipasa pancreática sobre la leche homogenizada.

1.- Coloque 5 tubos de ensaye de 15 x 150 en su gradilla y numérelos.

2.- Añada 10 ml de leche homogenizada a cada uno de los cincos tubos.

3.- Añada 3.0 ml de pancreática al 1 % a los cinco tubos. INMEDIATAMENTE agite el tubo 1 y vacíe su contenido a un vaso de precipitados de 250 ml, que contenga 25 ml de alcohol etílico de 95 grados. Agite también los tubos 2, 3, 4 y 5 y llévelos al baño de agua a 37 ° C, anotando la temperatura.

4.- Agite bien el contenido del primer vaso de precipitados. Añada 0.5 ml de fenoftaleina y titule con KOH 0.05 N hasta un color rosa permanente.

5.- A los 10 minutos saque el tubo numero 2, vacíe su contenido a otro vaso de precipitados con 25 ml de alcohol etílico. Añada 0.5 ml de fenoftaleina y titule con KOH de la misma manera que en el caso anterior.

6.- A los 20 minutos saque el tubo 3, a los 30 minutos el tubo 4 y a los 40 minutos el tubo numero 5. Déles el mismo tratamiento que al tubo 1.

7.- Para los cálculos reste el valor obtenido en el tubo 1 que es el testigo, de los valores obtenidos en los siguientes tubos.

8.- Calcule los mililitros de KOH consumidos en cada tubo, y en una hoja de papel milimétrico grafique milímetros de KOH contra tiempo.

OBSERVACIONES

Tabla 1. Datos obtenidos por los equipos en la titulación con KOH

Tabla 2. Tipos de leche utilizados por cada equipo

DISCUSIÓN


La lipasa cataliza la hidrólisis de los ácidos grasos. Los triglicéridos son compuestos insolubles en agua. Para poder realizar la hidrólisis utilizamos KOH disuelto en alcohol etílico. Como el sustrato de las lipasas son los triglicéridos de cadena larga a los cuales hidroliza rompiendo la unión ester en la posición alfa; por lo tanto, hay más triglicéridos después del rompimiento.
Esto nos demuestra porque cada vez se necesita mas mL de KOH para que los ácidos se hidrolicen, pues cada vez que dejábamos avanzar más la reacción mediante el calor del baño de agua, más triglicéridos habían en disolución.
También notamos una proporcionalidad en cuanto al tipo de leche que utilizamos. La leche entera que contiene un 4% de grasa, fue la que utilizó más mL de KOH, lo que nos indica que contiene muchos triglicéridos. El equipo #7 reporto el valor más alto, con 7.5 mL y mínimo de 4.9 del equipo #8. La leche semidescremada gasto un poco menos, con 6 mL como valor más alto en el equipo #3. Lo mínimo que gasto fue de 5.6 mL por el equipo #6. Según la etiqueta, contiene 1.6% en grasa, por lo que es lógico que gastara menos que la leche entera. La leche light gasto mucho menos que las otras leches. Su valor máximo reportado fue de 3.1 mL con el equipo #4 y mínimo de 2.4 mL con el equipo #2.
En promedio, la leche entera gastó 6.2, la leche semidescremada gasto 5.8 mL, mientras que la leche deslactosada light utilizo 2.75 mL de KOH para la hidrólisis. Por lo que este método podría servir para comprobar que las leches con un tratamiento adicional pueden reducir su cantidad de ácidos grasos y cuidar nuestra salud.


CONCLUSIÓN
Se comprobó la actividad de las lipasas en la hidrólisis de ácidos grasos mediante la titulación con KOH. Este proceso también nos permitió comprobar que la leche entera tiene más triglicéridos que la leche light y la semidescremada.

CUESTIONARIO

1. ¿Cuál es la acción de la lipasa pancreática? ¿Cuál es la diferencia entre lipasa y esterasa?
La lipasa pancreática cataliza la hidrólisis de los ácidos grasos. La diferencia se basa en su especificidad preferencial selectiva, es decir el substrato de la lipasa son triglicéridos de ácidos grasos de cadena larga, mientras que para las esterasas son los esteres sencillos de ácidos de bajo peso molecular.
2. ¿Para qué sirven las sales biliares en la hidrólisis de las grasas?
Para acelerar las reacciones de hidrólisis. Como ocurre en dos procesos, el rompimiento de los enlaces alfa es rápido, pero el de enlaces beta es lento. Las sales biliares como Taurocolato o Glicocolato de sodio, emulsifican y solubilizan a los lípidos, haciendo que la reacciones se aceleren.
3. ¿Por qué en nuestro experimento para demostrar la acción de la lipasa podemos usar leche homogenizada, y como se debería hacer el experimento si se usara leche no homogenizada?
Los triglicéridos son insolubles en agua, por lo que es necesario trabajar con emulsiones. La leche homogeneizada ya no tenemos que emulsificar las grasas, pues ya vienen en glóbulos finamente divididos, y consiguientemente no hay necesidad de una emulsificación ulterior. Si la leche no se encuentra homogenizada la grasa estará muy entera, por lo que se tendrá que emulsificar.
4. ¿Por qué en la demostración de la acción de la lipasa, el KOH consumido en la titilación, aumenta en cantidad a medida que trascurre el tiempo de reacción?
Como los substratos de la lipasa son los triglicéridos de cadena larga a los cuales hidroliza, rompen la unión Ester en la posición alfa y por lo tanto hay más triglicéridos después del rompimiento para lo cual se necesita más mL de KOH, para que los ácidos reaccionen con la base en presencia del alcohol. Los productos son glicerol y sales de potasio de los ácidos grasos.
5. ¿Cuál es la acción de la hormona colecistocinina en el proceso normal de digestión de las grasas?
Las hormonas que controlan la digestión son la gastrina, la secretina y la colecistocinina. La colecistocinina hace que el páncreas crezca y produzca las enzimas del jugo pancreático. También hace que la vesícula biliar se vacíe.











BIBLIOGRAFIA

 Vejar Eva Irma. BIOQUIMICA METABOLICA Y ENZIMOLOGIA PRÁCTICAS. Universidad de Sonora, México, 1991. Páginas 15-19

 http://www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/ency/article/003465.htm

 http://es.wikipedia.org/wiki/Lipasa

 http://espanol.answers.yahoo.com/question/index?qid=20071027170417AAPfMzA

Analisis de cationes de los grupos 1 y 2 (Quimica analitica 1)

ANALISIS DE CATIONES DEL GRUPO 1 y2

OBJETIVO:
Identificar los cationes del grupo 1 y 2 aplicando los diferentes tipos de equilibrio químico de una muestra problema.
-La muestra que nos toco analizar es la “C”

OBSERVACIONES:

Manejamos dos muestras que manipulamos con los mismos procedimientos: la tipo y la problema “C”.
Análisis de cationes grupo 1
-En el paso 1, al agregar 2 gotas HCl 6M, la muestra “C” cambio a un color blanquecino y luego trasparente. La muestra tipo se formo un precipitado blanco. Después de centrifugar en la muestra tipo se observo un precipitado solido, mientras que en la muestra C se observa un precipitado fino al fondo del tubo.
Se vuelven a centrifugar obteniendo sólidos en ambos tubos. Después se introducen al baño maría, disolviéndose la muestra C, mientras que la tipo continúo con su precipitado.
En los residuos de la muestra tipo se observa precipitado blanco y al residuo de la muestra C se observan partículas oscuras.
Análisis de cationes grupo 2
Cuando a la tipo se le agrego Tioacetamida tomo una coloración amarilla que después de cierto tiempo paso a café.
Cuando a la “C” se le agrego tioacetamida formo un precipitado líquido color gris.
Ambas muestras se colocaron en el baño maría, al salir se les observo una coloración oscura y un olor hediondo. Se les agrego 1 ml de H2O y 12 gotas de tioacetamida. Se observa una parte esponjosa.
Después en el paso (D) se formaron precipitados. Se centrifuga como lo indica en el paso (E) y se formaron precipitados café. Se observa una evaporación.
En el paso (G) al agregar K2CrO4 al centrifugado, se observa un precipitado amarillo en ambas muestras.
En el paso (H) la muestra tipo presenta una coloración azul y la muestra C presenta una coloración blanca.
Al agregar Sn (OH)4 a los residuos de la muestra tipo y a la problema, se observo un precipitado negro.
En el paso (J) la muestra tipo presento un color azul.
A la muestra C se le agrego CH3CSNH2 y se obtuvo un precipitado amarillo.
RESULTADOS:
Cationes del grupo 1 identificados:
Muestra Tipo = Plata (I)
Muestra problema = Mercurio (I) y plomo (II)
Cationes del grupo 2 identificados:
Muestra Tipo: Cobre (II), Bismuto (II) Plomo
Muestra problema C: plomo, Bismuto, cadmio.

CONCLUSIONES

La identificación de cationes es un proceso largo y extenuante. Basta con cometer Un solo error para que todo se arruine. Se debe de prestar mucha atención a la hora de centrifugar y aplicar cada uno de los reactivos, aunque a nuestro equipo no le paso nada malo, pudimos observar a muchos compañeros cometer errores por no prestar la debida atención a la practica.
En nuestro caso, identificamos los cationes que nos proporcionaron las muestras problema C y la muestra tipo. Nos dimos cuenta que para tener un resultado satisfactorio debemos de haber separado primero los cationes del grupo I y después los del grupo 2 ya que sus precipitados pueden confundirse. Aprendimos que los cationes del grupo I precipitan con HCl 6M y los cationes del grupo II con tioacetamida que es una molécula que contiene H2S.
Los cationes del grupo I necesitan para su identificación precipitar como cloruros mientras que los cationes del grupo 2 precipitan como sulfuros.

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